Principe : La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l’action sur un substrat d’une enzyme préalablement fixée à l’anticorps.
Les principales méthodes sont :
- Indirect
L’ELISA indirect est utilisé lors de la recherche d’anticorps particuliers. Celui-ci peut être réalisé à visée quantitative (pour le dosage de protéines variées) ou qualitative (indique la présence ou l’absence d’un antigène dans l’échantillon)
- Sandwich
Cette technique fortement spécifique, consiste à isoler une protéine que l’on cherche à doser entre deux anticorps dirigés contre elle mais reconnaissant des épitopes différents.
Concrètement, le premier anticorps est fixé sur un support, suivi d’une incubation de la protéine à doser. Enfin, le deuxième anticorps vient reconnaître le complexe protéine/premier anticorps, on dit alors que la protéine est prise en sandwich entre les deux anticorps, d’où le nom de cette méthode.
Une coloration de plus en plus forte indique une concentration d’antigènes croissantes.
- Compétition
La compétition s’effectue entre les antigènes marqués (en quantité connue) et non marqués (en quantité à déterminer) pour leur liaison aux anticorps, qui sont en défaut. Ainsi plus les antigènes à doser sont nombreux, plus leur proportion parmi les antigènes retenus par les anticorps est grande, et plus le signal sera faible. Inversement, si la concentration initiale de l’antigène est faible, le signal sera fort.